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Streptamer® - sélection magnétique ou fluorescente des CD8+ et lymphocytes

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 Cytométrie

En bref

Dans les méthodes conventionnelles de sélection cellulaire, on utilise des anticorps couplés à des billes. Ceux-ci restent complexés aux cellules purifiées, ce qui peut modifier les propriétés intrinsèques des cellules étudiées. A la différence de ces méthodes conventionnelles, la technologie Streptamer® repose sur le marquage fluorescent ou l’isolement magnétique de cellules à l’aide d’agents réversibles, les Streptamers®. Ces agents ont l’avantage d’avoir d’excellentes intensités de marquage et de pouvoir être éliminés des cellules, qui conservent ainsi leurs fonctions biologiques.
Schéma Strptamers

Descriptif

Streptamer® : qu’est-ce que c’est ?
Les Streptamers® sont des multimères issus de l’oligomérisation de plusieurs molécules MHC I (MHC I Streptamers®) ou fragments Fab (Fab Streptamers®) couplés à un Strep-tag® sur de la Strep-Tactin®, elle-même conjuguée à une molécule fluorescente (PE ou APC) ou à des billes magnétiques. Les Strep-tag® sont de petits peptides et la ayant une affinité pour la Strep-Tactin® est un dérivé de la Streptavidine.


Comment sélectionne t-on ses cellules ?
Les MHC I Streptamers® présentent un antigène (peptide viral) spécifique des cellules T CD8+ que l’on cherche à isoler.
Les Streptamers® se lient ensuite aux cellules d’intérêt via l’intéraction du complexe CMH-antigène-TCR (MHC I Streptamers®) ou Fab-marqueur de surface (Fab Streptamers®).
Après séparation des cellules marquées des non-marquées par cytométrie en flux ou avec un aimant, de faibles concentrations de biotine sont ajoutées. La biotine entre en compétition avec la liaison des Strep-tag® et la Strep-Tactin®, entrainant la dissociation de cette dernière. Spontanément, les Strep-tags® se détachent ensuite des cellules.


La technologie Streptamer® est dite réversible car les cellules sélectionnées sont au final dépourvues des réactifs de marquage ayant servis à leur purification et conservent ainsi leurs fonctions biologiques. Il existe 2 types de Streptamers® comme cité plus haut :

 

Les Fab Streptamers®
Ils sont destinés à la sélection des lymphocytes T cells (CD3, CD4, CD8), des T mémoires (CD8, CD62L, CD45RA-), des T régulateurs (CD4, CD25, CD45RA), des cellules T naïves (CD8, CD62L, CD45RA) et des cellules B (CD19).


Les MHC I Streptamers®
Ils permettent de sélectionner des cellules T CD8+ antigène spécifique. L’antigène présenté par le Streptamer® est alors un peptide viral (nombreux peptides différents : différentes combinaison épitopes-allèles).

Avantages

  • Réversibilité : complète dissociation des réactifs de marquage (Streptamers®) des cellules après sélection :
    • Haute pureté et rendement
    • Activité biologique des cellules préservée
  • Système modulable : purification magnétique des cellules avec la Strep-Tactin® couplée à des nanobilles ou marquage fluorescent avec la Strep-Tactin® couplée à un marqueur fluorescent (PE/APC)
  • Sélection positive de populations rares avec différents marqueurs : sélection séquentielle des Treg avec les Fab Streptamers® (CD4+CD25+CD45RA)
  • Manipulation minimale des cellules

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